本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)會cDNA芯片的使用方法。了解各種基因芯片的基本原理和優(yōu)缺點(diǎn)。
由于基因芯片高速度、高通量、集約化和低成本的特點(diǎn)，基誕生以來就受到科學(xué)界的廣泛關(guān)注，正如晶體管電路向集成電路發(fā)展的經(jīng)歷一樣，分子生物學(xué)技術(shù)的集成化正在使生命科學(xué)的研究和應(yīng)用發(fā)生一場革命。ELISA試劑盒 根據(jù)固定在芯片載體上的核酸分子的不同，基因芯片可以分為cDNA芯片和寡核昔酸芯片等。寡核昔酸芯片主要基于光引導(dǎo)聚合技術(shù)，該技術(shù)是Affymetrix公司開發(fā)的技術(shù)，由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來越廣泛的應(yīng)用。 一、原理 基因芯片(Gene Chip,DNA Chip)，又稱DNA微陣列(DNA Micorarray)，是指按照預(yù)定位置固定在固相載體上很小面積內(nèi)的千萬個(gè)核酸分子所組成的微點(diǎn)陣陣列。在一定條件下，載體上的核酸分子可以與來自樣品的序列互補(bǔ)的核酸片段雜交。如果把樣品中的核酸片段進(jìn)行標(biāo)記，在的芯片閱讀儀上就可以檢測到雜交信號。ELISA試劑盒 基因芯片技術(shù)主要包括四個(gè)主要步驟：芯片制備、樣品制備、雜交反應(yīng)和信號檢測和結(jié)果分析。 1、芯片制備-目前制備芯片主要以玻璃片或硅片為載體，采用原位合成和微矩陣的方法將寡核苷酸片段或cDNA作為探針按順序排列在載體上。芯片的制備除了用到微加工工藝外，還需要使用機(jī)器人技術(shù)。以便能快速、準(zhǔn)確地將探針放置到芯片上的位置。 2、樣品制備-生物樣品往往是復(fù)雜的生物分子混合體，除少數(shù)特殊樣品外，一般不能直接與芯片反應(yīng)，有時(shí)樣品的量很小。所以，必須將樣品進(jìn)行提取、擴(kuò)增，獲取其中的蛋白質(zhì)或DNA、RNA，然后用熒光標(biāo)記，以提高檢測的靈敏度和使用者的安全性。
3、雜交反應(yīng)-雜交反應(yīng)是熒光標(biāo)記的樣品與芯片上的探針進(jìn)行的反應(yīng)產(chǎn)生一系列信息的過程。選擇合適的反應(yīng)條件能使生物分子間反應(yīng)處于狀況中，減少生物分子之間的錯配率。 4、信號檢測和結(jié)果分析-雜交反應(yīng)后的芯片上各個(gè)反應(yīng)點(diǎn)的熒光位置、熒光強(qiáng)弱經(jīng)過芯片掃描儀和相關(guān)軟件可以分析圖像，將熒光轉(zhuǎn)換成數(shù)據(jù)，即可以獲得有關(guān)生物信息。ELISA試劑盒 |
