（一） 原理 免疫電鏡技術(shù)是免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是在超微結(jié)構(gòu)水平研究和觀察抗原、抗體結(jié)合定位的一種方法學(xué)。它主要分為兩大類：一類是免疫凝集電鏡技術(shù)，即采用抗原抗體凝集反應(yīng)后，再經(jīng)負(fù)染色直接在電鏡下觀察；另一類則是免疫電鏡定位技術(shù)。該項(xiàng)技術(shù)是利用帶有特殊標(biāo)記的抗體與相應(yīng)抗原相結(jié)合，在電子顯微鏡下觀察，由于標(biāo)準(zhǔn)物形成一定的電子密度而指示出相應(yīng)抗原所在的部位。免疫電鏡的應(yīng)用，使得抗原和抗體定位的研究進(jìn)入到亞細(xì)胞的水平。 （二）影響免疫電鏡的一些因素 1.標(biāo)記物 用于電鏡觀察的標(biāo)記物有三類：一類是電子密度致密的標(biāo)記物，如鐵蛋白、辣根過氧化物酶等。另一類則是放射性同位素，如135I、35S、32P、14C、3H等，第三類則是有*形狀的標(biāo)記物，如血蘭蛋白、噬菌體等。 對(duì)標(biāo)記物的要求是：具有特定的形狀、不影響抗原抗體復(fù)合物的特性與形狀。目前用于免疫電鏡的標(biāo)記物主要是鐵蛋白和HRP.兩者各有其優(yōu)點(diǎn)，鐵蛋白電子密度致密。觀察時(shí)反差大，優(yōu)于酶標(biāo)記，但鐵蛋白分子量大（460 000），穿透能力差，所以適于細(xì)胞表面抗原的定位，另外鐵蛋白的標(biāo)記過程比較復(fù)雜。HRP分子量?。?0 000），穿透力強(qiáng)，有利于標(biāo)記抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，適于細(xì)胞內(nèi)的抗原定位。 2.固定劑 固定是免疫電鏡較關(guān)鍵的一步，免疫電鏡中的固定與一般超薄切片中的固定的不同之點(diǎn)在于既考慮保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，又要考慮到抗原的失活性問題。 |
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